Ип за 1 день: Регистрация ИП удаленно за 1 день, если прописан в другом регионе

Сообщите потребности вашего бизнеса, и мы предложим самое подходящее решение на лучших условиях!

Стоимость зависит от технических условий подключения. Оставьте заявку на расчет по вашим задачам.

ИНТЕРНЕТ В ОФИС ЗА 1 ДЕНЬ

Подключить интернет в офис можно в течение 1 рабочего дня.
Подключение по волоконно-оптическому кабелю и по технологии Wi-Fi или WiMAX.

WI-FI для бизнеса

Опыт создания WI-FI сетей любой сложности в кратчайшие сроки, без вмешательства в конструкцию здания и работу сотрудников.
Wi-Fi с авторизацией

Резервный интернет-канал

• Резервный канал для доступа в интернет по всей России. Дешевле, чем основной канал. 
• Подключите кассовую технику к надежному Интернету по ФЗ от 22.05.2003 N 54-ФЗ «О применении контрольно-кассовой техники при осуществлении наличных денежных расчетов и (или) расчетов с использованием электронных средств платежа».

Объединение офисов по IP-VPN

Организация трансляций

• Видеотрансляция корпоративных и муниципальных мероприятий
• При подключении видеонаблюдения трансляция видеопотока на сайт или Youtube – без дополнительной платы
• Аудиоконференции
• Публичный бесшовный Wi-Fi до 10 Гбит/с
• Услуги дата-центра
• Резервирование связи и электропитания
• Организация телефонии для пресс-центра
• Монтаж за сутки
• Выделенная линия техподдержки

Услуги для безопасности

• Выполнение требований законодательства и безопасная передача конфиденциальных данных
• Комплексная защита корпоративных данных и пользователей от кибер-атак
• Контент-фильтрация и офисный контроль – защита от утечек информации, контроль эффективности труда и учет рабочего времени сотрудников
• Антивирусы для бизнеса

Программы для офиса

• 1С:Предприятие 8 через Интернет
• Microsoft Office 365
• amoCRM

Дополнительные работы

Строим и обслуживаем сети связи, а также программируем и настраиваем оборудование.

Прейскурант на дополнительные работы (pdf)

Ваша заявка успешно принята. Спасибо за обращение!

Лизинг для ИП — Аванс от 5%

Покупка коммерческого транспорта, производственного оборудования, офисной техники или другого имущества для бизнеса – задача, решить которую можно при наличии серьезного стартового капитала или возможности взять кредит на значительную сумму. Более выгодная альтернатива для представителей малого и среднего бизнеса – лизинг для ИП. В рамках доступных лизинговых программ предприниматели могут обзавестись всем необходимым для эффективной работы с минимальными затратами. К тому же, четкое следование договору с лизингодателем позволит получить права собственности на имущество сразу после погашения всех платежей.

Условия для предпринимателей

Чаще всего лизинг используется для покупки дорогого транспорта – грузовых и пассажирских автомобилей, спецтехники. При этом покупатель может выбирать не только новые модели у официальных дилеров, но иварианты с пробегом, доступные для приобретения у частных продавцов. Условия сотрудничества с лизингодателем в каждом из случаев остаются выгодными. Аналогично работают лизинговые программы по технике и оборудованию для производства и ремонта, зданиям и офисам.

Лизинговая компания самостоятельно выкупает необходимое клиенту имущество у продавца, привлекая собственные средства или займы. При этом лизингодатель ставит предмет лизинга на свой баланс, передавая лизингополучателю права на использование. После выплаты всей суммы, заявленной в лизинговом договоре, покупатель получает право собственности. Все действия в рамках подготовки лизинговых соглашений выполняются максимально оперативно (несколько рабочих дней) и требуют минимум документов для согласования.

Процедура покупки имущества в лизинг

Индивидуальный предприниматель должен подготовиться к сотрудничеству с лизингодателем. Перед обращением рекомендуется точно определиться с объектами, которые будут приобретаться. Подбирается оптимальный срок погашения стоимости имущества и готовятся документы. Узнать об ориентировочной сумме платежей по лизингу можно через специальные финансовые калькуляторы. Дальнейшие действия:

• Подача заявки – через специальную форму на сайте лизингодателя, лично или по электронной почте. На этом этапе заявитель предоставляет сведения об объектах, которые планирует купить, сообщает о некоторых особенностях бизнеса.
• Одобрение заявки – если лизингодатель может удовлетворить потребности заявителя, то менеджеры связываются с клиентом для подготовки коммерческого предложения. На данном шаге в лизинговую компанию отправляются документы.
• Подготовка договора – специалисты формируют соглашение с учетом общей суммы, Федерального закона 164-ФЗ и особенностей бизнеса клиента. Проект договора отправляется для согласования лизингополучателю. При необходимости возможно внесение изменений в график платежей или иные пункты договора.
• Подписание соглашение и оплата первоначального взноса – после обсуждения всех деталей стороны подписывают договор лизинга. Предприниматель перечисляет заранее оговоренную сумму первоначального взноса и получает все объекты лизинга по акту приема-передачи с возможностью начать эксплуатацию сразу же.

Все перечисленные задачи решаются оперативно, благодаря чему у ИП не возникает задержек в работе. Добиться такой скорости при получении кредита в банке сейчас практически невозможно.

Требования для ИП

Для безопасного и взаимовыгодного сотрудничества предприниматель и его деятельность должны соответствовать набору требований. Каждая лизинговая компания вправе устанавливать свои правила, если они не противоречат Федеральному закону 164-ФЗ и другим нормативам. Чаще всего к лизингополучателям применяются такие требования:

• возраст от 21 года;
• не менее полугода с даты получения статуса ИП;
• возможность подтвердить факт стабильного получения прибыли;
• наличие всех документов, получаемых в рамках предпринимательства.

Лизинг подходит для разных систем налогообложения, включая ЕНВД и УСН.

Первоначальный платеж

На этапе согласования условий сотрудничества лизингодатель предоставляет сведения о взносах по лизингу и график оплат. Обязательное условие –перечисление покупателем авансового платежа, размер которого варьируется в зависимости от ситуации. Чаще всего предпринимателям предлагается оплатить 10-20% от суммы, указанной в соглашении на покупку предмета лизинга и поставщика. Не исключено повышение ставки первого взноса до 40%. Таким образом лизинговая компания дополнительно страхуется от трудностей, которые могут возникнуть в случае с недобросовестными клиентами.

Лизинг без аванса компании предоставляют клиентам достаточно редко. В случае, если к платёжеспособности клиента возникают вопросы, вместо финансового обеспечения в виде первого взноса лизингополучателям могут предложить два варианта сотрудничества:

• с привлечением третьего лица в качестве поручителя;
• с передачей ликвидного имущества в качестве залога.

Варианты обсуждаются индивидуально на этапе консультации или согласования сделки.

Преимущества для предпринимателей

Часто лизинг сравнивается с долгосрочной арендой или кредитами. Однако на фоне данных финансовых инструментов лизинговые сделки отличаются такими плюсами для ИП:

• быстрое получение имущества, необходимого для ведения коммерческой деятельности;
• предприниматель может самостоятельно выбирать поставщика или доверить эту работу лизингодателю;
• не требуется бизнес-план для ИП, которые стабильно функционируют и имеют хорошие показатели по прибыльности;
• можно получить налоговые льготы, а соответственно снизить финансовую нагрузку на бизнес;
• многие компании-лизингодатели дают возможность досрочного погашения стоимости объектов без санкций, присущих банкам.

Главное для покупателя – найти лизинговую компанию с максимально подходящими условиями. Не менее важно –своевременно вносить платежи по договору и соблюдать условия лизингового соглашения.

Как я вернул свой SP через несколько дней: NevilleGoddard

Это будет мой последний пост на некоторое время, так как я собираюсь держаться подальше от социальных сетей, чтобы сосредоточиться на своих новых проявлениях.

Короче говоря, мой SP заблокировал меня на пару месяцев, он разблокировал меня только на 24 часа в течение этого времени и снова заблокировал меня сразу после этого. В то время я соблюдала довольно хорошую психологическую диету, но она определенно не была сверх строгой. 13 августа я устал проигрывать и решил, что пойду олл-ин и добьюсь успеха, несмотря ни на что.Итак, вот что я сделал:

1. Игнорированная реальность: это обязательно. Я не обращал внимания ни на что, что противоречило моим желаниям. Когда я начинал чувствовать себя плохо, я просто напоминал себе, что это была старая реальность, и ее заменяли той, которую я хотел.

2. Строгая ментальная диета: когда я говорю «строгая», я имею в виду именно это. Я не допускал негативных мыслей. Как только я заметил одну, я сосредоточился на своей умственной диете и повторял противоположные положительные мысли, пока не почувствовал себя лучше.Иногда это было пару раз, а иногда и больше. Но я был предан делу и знал, что смогу это сделать. Через 2-3 дня все мои негативные мысли исчезли.

3. Утверждения / намерения: Я написал несколько намерений / утверждений на свой телефон и читал их много раз в день. Некоторые из них заключались в том, что мой ИП любит меня и только меня, он хочет быть со мной и только со мной, он находится в любовных и преданных отношениях со мной, потому что я лучшая женщина на земле, и он это знает, чем больше он пытается чтобы забыть меня, тем больше он хочет быть со мной (это было действительно полезно, когда я беспокоился о том, что он двинется дальше), я бог, и я всегда получаю то, что хочу, я заслуживаю всего, что хочу, наша любовь сильнее чем что-либо, и он это чувствует и т. д.Ключ в том, чтобы найти, какие аффирмации работают для вас. Если вы повторяете чьи-то аффирмации, но они не находят отклика у вас, тогда это бесполезно. Чего ты хочешь ? Разберитесь с этим и создайте вокруг него свои собственные аффирмации.

4. НЕ ИЩИТЕ РЕЗУЛЬТАТОВ: я не могу не подчеркнуть, насколько это важно. Я так долго сидел на психической диете в течение нескольких часов, а потом продолжал искать результаты. Не надо смотреть, результат ПРИДЕТ К ВАМ! Они придут автоматически, и вам не нужно пошевелить пальцем, чтобы это произошло, вам не нужно продолжать искать.Вам нужно только передумать, так что вообще не сосредотачивайтесь на своем трехмерном мире. Это не изменится, если вы будете постоянно уделять этому внимание.

5. Наслаждайтесь процессом: жить в своем идеальном мире мысленно на самом деле очень весело, и через пару дней вы почувствуете себя действительно хорошо. Когда вы делаете это для развлечения и действительно наслаждаетесь процессом, это кажется естественным, очень быстрым, а результаты приходят еще быстрее. Отпустите любую нужду, отчаяние и давление.

6. Не реагирую ни на какие неудачи: у меня была одна неудача за два дня до того, как я получил обратно свой SP.Это действительно противоречило, и я был расстроен, может быть, час или два, а затем вернулся на правильный путь и повторил свои утверждения. Он пытался позвонить мне через два дня после этого. Неудачи вообще ничего не значат, ничего не значит, если вы не думаете, что это так.

7. Не обращайте внимания на время. Если вы живете в своем уме, он уже принадлежит вам. Не устанавливайте никаких временных ограничений, это контрпродуктивно.

8) Держитесь подальше от социальных сетей: вам не нужно больше историй успеха, вам не нужно больше чаевых, вам не нужен кто-то, чтобы вас успокоить, вам не нужно пробовать новую технику.Вам просто нужно поработать и перестать искать поддержки.

Вот и все. Теперь я просто хочу сказать, что вы, вероятно, не поверите своим утверждениям в течение первых нескольких дней, и это нормально. Если бы вы им сразу поверили, вам вообще не нужно было бы соблюдать ментальную диету. Настаивайте, пока не почувствуете себя хорошо, а затем через несколько дней вы поверите. Это не волшебная формула, это способ изменить свое душевное состояние. Ваш трехмерный мир изменится, как только вы передумаете.Делайте работу, чтобы изменить свое мнение, а не для получения результатов. Когда вы это сделаете, результаты появятся автоматически. Но вы должны перестать быть жертвой и взять под контроль свой разум. Быть жертвой не даст вам ничего, чего вы хотите. Вы бог, так что перестаньте соглашаться на то, чего вы не хотите, и идите ва-банк. Это работает. Вы не можете потерпеть неудачу, если действительно передумаете.

Как я снова проявила свой SP после 1 года отсутствия контактов: NevilleGoddard

Это моя история о том, как я проявила своего мужа много лет назад, прежде чем мы поженились, после того, как меня заблокировали, и мы не контактировали чуть больше года .Я пытался опубликовать это раньше, но по какой-то причине он был удален, и это довольно долго, так что приготовьтесь. 😂❤️ Я также разместил это на сабвуфере Невилла Годдарда sp

Всем привет! Надеюсь, у вас все хорошо! Я пишу этот пост в надежде вдохновить всех вас и сообщить, что обстоятельства не имеют значения. Итак, я и моя подруга женаты, и у нас есть дочь, а много лет назад мы были в разлуке и не общались чуть больше года. Он ненавидел меня, и я был заблокирован во всех социальных сетях, о которых вы только можете подумать, моя семья была заблокирована, мои друзья были заблокированы, и мой номер телефона был заблокирован, у нас был действительно тяжелый разрыв.

Итак, когда я впервые узнал о законе, я был в отчаянии и постоянно искал подтверждения от ютуберов, тренеров и других людей, надеясь успокоить меня. Я помню, как постоянно повторял бессмысленные утверждения, все время беспокоился об этом, все время пытался визуализировать, пытался контролировать каждую маленькую мысль, и, если честно, мне стало еще хуже. Так что после всего этого мне надоели ютуберы, тренеры и т. Д., И я начал верить, что закон и манифестация не реальны.Так что я бросил это и плакал около недели. Затем я взял себя в руки и решил на самом деле прочитать и послушать источник всего этого для себя (Невилл Годдард).

Я прочитал все его книги и прослушал все его лекции на YouTube (которые я смог найти), и все это меня заинтересовало. То, что говорил Невилл, имело для меня полный смысл и заставило меня понять, что речь идет не о бездумном утверждении в течение всего дня, как попугай, а о том, чтобы на самом деле визуализировать, ощущать это реальным и упорствовать в желаемом взгляде.Он также сказал, что самооценка меняет мир вокруг вас, что также имело большой смысл, потому что у меня был опыт тестирования этого, так что это как бы щелкнуло для меня.

Я решил сосредоточиться на концепции самого себя и начать заботиться о себе. Больше никаких бессмысленных утверждений или беспокойства, когда дело доходит до проявления моего sp. Однажды вечером перед сном я решил провести САТС и представил сцену (от первого лица), где у нас обоих были кольца на пальцах, и мы сидели на скамейке в парке, касаясь колец друг друга и улыбаясь друг другу.После этой сцены я решил бросить это и дать семени прорасти. Я упорствовал в желаемом состоянии, не повторяя аффирмации в течение всего дня, как попугай, а живя в мире и сосредотачиваясь на себе и других вещах и просто чувствуя себя небрежно и довольным своей жизнью (как если бы я уже имел свой sp) и Примерно через 2 недели он позвонил мне и пригласил на свидание.

После месяцев и месяцев «попыток» проявить его, пытаясь заставить себя визуализировать каждый день, писать сценарии и повторять утверждения, которые весь день кажутся мне полной ложью, то, что заставило меня переключиться на меня, было, когда я позволил семени расти без навязчивых мыслей и утверждений о нем весь день.А после этого его возвращение было проще простого. Некоторые люди думают, что упорство в желаемом состоянии означает, что вы должны подтверждать каждый день в течение всего дня, и даже я подумал, что сначала, но на самом деле я обнаружил и обнаружил, что Невилл имеет в виду под этим, в основном просто продолжать свою жизнь, как если бы у вас уже есть Это. Это то, в чем вы упорствуете.

По моему личному опыту, утверждения о моем SP заставили меня чувствовать себя еще хуже, потому что это было похоже на ложь. Он должен казаться естественным, чтобы проявляться, если он кажется «утомительным» или «тяжелым», он, скорее всего, не проявится в трехмерном пространстве, и я знаю это на основе личного опыта.Я месяцами и месяцами утверждал, ничего не двигаясь, кроме SATS, и жизнь в желаемом состоянии действительно заставляла меня работать. Сейчас я и мой СП женаты, и у нас есть прекрасная дочь, и несколько лет назад, когда мы поженились, ТОЧНАЯ сцена произошла в реальной жизни. Мы сидели в парке, встретились с кольцами на пальцах, держались за руки и улыбались друг другу.

До сих пор помню каждую мелочь об этой сцене, и она заставляет меня улыбаться каждый раз, когда она просто тает мое сердце ❤️.Но в любом случае я надеюсь, что это дало вам некоторую надежду, и, пожалуйста, никогда не сдавайтесь. Проявление на 100% реально, и да, вы, безусловно, можете проявить ЛЮБОГО, кого пожелаете. ❤️ И помните, если их проявление кажется «утомительным» или «тяжелым трудом», это не сработает, потому что оно должно казаться естественным и реальным. По моему личному опыту, мне никогда не нравились аффирмации, потому что мне казалось, что я лгу самому себе, и было утомительно говорить их, когда они не были правдой, поэтому я люблю визуализировать и делать SATS. Помните, что упорство в желаемом СОСТОЯНИИ не означает, что вы должны утверждать каждый день весь день, особенно если это кажется ложью, утомлением или чем-то, что вы «должны делать», потому что это определенно нежелательное состояние в моих глазах.

Лично я использую аффирмации только для таких мелочей, как головная боль или самооценка, потому что это то, что мне нравится делать. Недавно ко мне пришли несколько друзей и попросили совета, потому что, я думаю, какой-то ютубер сказал им подтверждать каждый день весь день, и они были очень расстроены из-за того, как долго они пытались и не получали ни чего, а я не хотел их чтобы пройти через то, через что я прошел, поэтому я помог им сломать Невилла, но после того, как я объяснил им свой процесс и то, как я это сделал, я помог им довольно быстро проявить свои SP или то, что они хотели, по сравнению с тем, что они пытались в течение нескольких месяцев.В любом случае, я надеюсь, что это поможет и вдохновит вас не сдаваться❤️ удачного дня!

iShares Core S&P 500 ETF

Обсудите со своим специалистом по финансовому планированию сегодня

Поделитесь этим фондом со своим специалистом по финансовому планированию, чтобы узнать, как он может вписаться в ваш портфель.

Купить через вашего брокера

средств iShares доступны через онлайн-брокерские фирмы.

Все биржевые фонды iShares торгуются без комиссии онлайн через Fidelity.

Прежде чем привлекать Fidelity или любого брокера-дилера, вы должны оценить общие сборы и сборы фирмы, а также предоставляемые услуги. Предложение о бесплатной комиссии распространяется на онлайн-покупки избранных ETF iShares в учетной записи Fidelity. При продаже ETF взимается комиссия за оценку деятельности (от 0,01 до 0,03 доллара за 1 000 долларов основной суммы). Для ETF iShares Fidelity получает компенсацию от спонсора ETF и / или его аффилированных лиц в связи с эксклюзивной долгосрочной маркетинговой программой, которая включает продвижение iShares ETF и включение фондов iShares в определенные платформы и инвестиционные программы Fidelity Brokerage Services.Обратите внимание, что на эту ценную бумагу не распространяется маржа в течение 30 дней с даты расчета, после чего она автоматически становится пригодной для маржинального обеспечения. Дополнительную информацию об источниках, суммах и условиях компенсации можно найти в проспекте эмиссии ETF и сопутствующих документах. Fidelity может добавлять или отменять комиссии по ETF без предварительного уведомления.

Средства распределяются BlackRock Investments, LLC (вместе с ее аффилированными лицами, «BlackRock»).

© BlackRock, Inc., 2019 г.Все права защищены. BLACKROCK, РЕШЕНИЯ BLACKROCK, ПОСТРОЕННЫЕ НА BLACKROCK, ALADDIN, iSHARES, iBONDS, iTHINKING, iSHARES CONNECT, FUND FRENZY, LIFEPATH, ЧТО Я ДЕЛАТЬ С СВОИМИ ДЕНЬГАМИ, ИНВЕСТИРОВАТЬ ДЛЯ НОВОГО МИРА, ПОСТРОИТЬ ЯЗЫК за Graphic, CoRI и логотип CoRI являются зарегистрированными и незарегистрированными товарными знаками BlackRock, Inc. или ее дочерних компаний в США и других странах. Все остальные товарные знаки являются собственностью их владельцев.

ICRMH0719U-885409

% PDF-1.4 % 1661 0 объект> эндобдж xref 1661 172 0000000016 00000 н. 0000004706 00000 н. 0000004907 00000 н. 0000004960 00000 н. 0000004988 00000 н. 0000005036 00000 н. 0000005072 00000 н. 0000005265 00000 н. 0000005396 00000 н. 0000005531 00000 н. 0000005681 00000 п. 0000005839 00000 н. 0000005922 00000 н. 0000006002 00000 н. 0000006084 00000 н. 0000006166 00000 н. 0000006248 00000 п. 0000006330 00000 н. 0000006412 00000 н. 0000006494 00000 н. 0000006576 00000 н. 0000006658 00000 н. 0000006740 00000 н. 0000006822 00000 н. 0000006904 00000 н. 0000006986 00000 п. 0000007068 00000 н. 0000007150 00000 н. 0000007232 00000 н. 0000007314 00000 н. 0000007396 00000 н. 0000007478 00000 н. 0000007560 00000 н. 0000007642 00000 н. 0000007724 00000 н. 0000007806 00000 н. 0000007888 00000 н. 0000007970 00000 п. 0000008052 00000 н. 0000008134 00000 п. 0000008216 00000 н. 0000008298 00000 н. 0000008380 00000 н. 0000008462 00000 п. 0000008544 00000 н. 0000008626 00000 н. 0000008708 00000 н. 0000008790 00000 н. 0000008872 00000 н. 0000008954 00000 н. 0000009036 00000 н. 0000009118 00000 п. 0000009200 00000 п. 0000009282 00000 н. 0000009364 00000 п. 0000009446 00000 н. 0000009528 00000 н. 0000009610 00000 п. 0000009692 00000 п. 0000009774 00000 н. 0000009856 00000 н. 0000009938 00000 н. 0000010020 00000 н. 0000010102 00000 п. 0000010184 00000 п. 0000010265 00000 п. 0000010346 00000 п. 0000010426 00000 п. 0000010652 00000 п. 0000011135 00000 п. 0000011719 00000 п. 0000012534 00000 п. 0000013166 00000 п. 0000013216 00000 п. 0000013617 00000 п. 0000013911 00000 п. 0000018123 00000 п. 0000018472 00000 п. 0000018743 00000 п. 0000023799 00000 п. 0000024408 00000 п. 0000024800 00000 п. 0000025215 00000 п. 0000025293 00000 п. 0000029180 00000 п. 0000029665 00000 п. 0000032566 00000 п. 0000032604 00000 п. 0000032730 00000 н. 0000035401 00000 п. 0000036255 00000 п. 0000042767 00000 н. 0000043566 00000 п. 0000050159 00000 п. 0000050402 00000 п. 0000050599 00000 п. 0000050659 00000 п. 0000050734 00000 п. 0000050816 00000 п. 0000050982 00000 п. 0000051101 00000 п. 0000051284 00000 п. 0000051421 00000 п. 0000051510 00000 п. 0000051614 00000 п. 0000051778 00000 п. 0000051876 00000 п. 0000051982 00000 п. 0000052127 00000 п. 0000052251 00000 п. 0000052394 00000 п. 0000052539 00000 п. 0000052673 00000 п. 0000052845 00000 п. 0000053006 00000 п. 0000053092 00000 п. 0000053225 00000 п. 0000053302 00000 п. 0000053400 00000 п. 0000053508 00000 п. 0000053585 00000 п. 0000053670 00000 п. 0000053797 00000 п. 0000053910 00000 п. 0000053999 00000 п. 0000054141 00000 п. 0000054246 00000 п. 0000054350 00000 п. 0000054463 00000 п. 0000054581 00000 п. 0000054737 00000 п. 0000054865 00000 п. 0000055011 00000 п. 0000055156 00000 п. 0000055248 00000 п. 0000055351 00000 п. 0000055438 00000 п. 0000055532 00000 п. 0000055700 00000 п. 0000055787 00000 п. 0000055875 00000 п. 0000056023 00000 п. 0000056117 00000 п. 0000056211 00000 п. 0000056353 00000 п. 0000056447 00000 п. 0000056540 00000 п. 0000056641 00000 п. 0000056752 00000 п. 0000056867 00000 п. 0000056989 00000 п. 0000057094 00000 п. 0000057193 00000 п. 0000057299 00000 п. 0000057411 00000 п. 0000057521 00000 п. 0000057633 00000 п. 0000057760 00000 п. 0000057866 00000 п. 0000057996 00000 п. 0000058083 00000 п. 0000058186 00000 п. 0000058286 00000 п. 0000058400 00000 н. 0000058522 00000 п. 0000058632 00000 п. 0000058746 00000 п. 0000058846 00000 п. 0000058952 00000 п. 0000059092 00000 п. 0000059182 00000 п. 0000003736 00000 н. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 1832 0 obj> поток xb«f`Ab, j] 90

Недавно обнаруженный Synechococcus sp.PCC 11901 — это надежный штамм цианобактерий для производства высокой биомассы

Выделение и характеристика штамма

Поскольку нашей основной целью было изолировать быстрорастущий, предпочтительно морской штамм цианобактерий, который не будет конкурировать за пресноводные ресурсы и может переносить широкий спектр абиотических подчеркивает, что мы собрали пробы морской воды на местной плавучей рыбной ферме, расположенной в устье реки Джохор в Сингапуре. Обогащение проб воды и последующее повторное нанесение штрихов на твердую среду привели к выделению быстрорастущей колонии цианобактерий.Посев в жидкую среду AD7, широко используемую для выращивания морских цианобактерий ^22,23 , привел к быстрому росту, но только после длительной лаг-фазы (≈24 ч), что свидетельствует об ограничении питательных веществ. Поскольку большинству океанического фитопланктона для роста требуется кобаламин (витамин B ₁₂ ), а его концентрация в морях и океанах колеблется от 0 до 3 мкМ ^24,25 , мы добавили в культуры изолированного штамма ксеника 3 мкМ кобаламина, что облегчило фаза запаздывания. После разведения культуры на твердую среду с кобаламином были обнаружены небольшие прозрачные бактериальные колонии вблизи колоний цианобактерий, и оба штамма были дополнительно очищены штриховкой на смеси AD7 и LB в соотношении 1: 1.В целом секвенирование 16S рРНК и филогенетический анализ показали, что аксенный цианобактериальный штамм был членом группы Synechococcales (сейчас депонирован в Коллекции культур Пастера как Synechococcus sp. PCC 11901) и что ближайшие филогенетические родственники компаньона гетеротрофный бактериальный штамм принадлежит к морскому роду Thalassococcus ²⁶ . И аксенический, и ксенический штаммы PCC 11901 одинаково хорошо росли в присутствии кобаламина, достигая ОП ₇₃₀ ≈ 23 через 72 часа (рис.1а). Напротив, рост аксенического штамма сильно подавлялся в отсутствие добавленного кобаламина, при этом наблюдаемый остаточный рост, возможно, отражал сохранение внутриклеточных запасов кобаламина или метионина ²⁷ в посевном материале (рис. 1а). Эти результаты предполагают, что PCC 11901 является ауксотрофным и его рост зависит от доступности кобаламина в среде для выращивания.

a Axenic и xenic (заражены Thalassococcus sp.) штаммы, выращенные на среде AD7 с (+) и без (-) добавления кобаламина (витамин B ₁₂ ). b Скорость роста аксенического штамма, выращенного в среде AD7 с различной (общей) концентрацией хлорида натрия (0–10%). Кривые роста см. На дополнительном рис. 3. Условия роста для a и b : 38 ° C, 225 об / мин, 300 мкмоль фотонов m ⁻² с ⁻¹ Интенсивность света (светодиод RGB 4: 2: 1 соотношение) и 1% (об. / об.) CO ₂ . c Скорость роста аксенического штамма, культивированного в различных температурных условиях при 300 мкмоль фотонов, м ^-2 с ^-1 интенсивности света и 1% (об. / Об.) CO ₂ . d Скорость роста аксенического штамма, культивированного при различных условиях освещения, температуры и CO. ₂ . Для всех кривых роста и времени удвоения см. Дополнительный рисунок 4 и дополнительную таблицу 1. Точки данных с полосами ошибок представляют собой среднее значение n = 3 биологических повтора ± стандартное отклонение.

Хотя геном изолированного штамма Thalassococcus не был секвенирован, другой штамм Thalassococcus sp. штамм (SH-1) обладает генами биосинтеза кобаламина (номер доступа в GenBank CP027665.1). Учитывая предыдущие доказательства мутуалистического взаимодействия между кобаламин-зависимыми микроводорослями и бактериями ²⁵ , весьма вероятно, что контаминант Thalassococcus в ксенической культуре может служить естественным симбиотическим партнером для штамма PCC 11901, обеспечивающего его кобаламином, при потреблении питательных веществ, выделяемых цианобактериями.

Подобно PCC 7002 ²⁸ , штамм PCC 11901 может расти миксотрофно в присутствии глицерина и фотогетеротрофно в присутствии глицерина и гербицида DCMU, который ингибирует фотосинтетический поток электронов, хотя рост замедляется (дополнительный рис.1в). Напротив, очень небольшой рост или его отсутствие наблюдалось после одной недели инкубации с глюкозой и DCMU (дополнительный рисунок 1d).

Анализ морфологии клеток показал, что PCC 11901, хотя и одноклеточный, может также образовывать короткие филаменты из 2-6 клеток, независимо от фазы роста (Supplementary Fig. 2). Отдельные клетки имеют удлиненную форму от 1,5 до 3,5 мкм в длину и 1-1,5 мкм в ширину. В среднем (90 · 103 n 90 · 104 = 45) клетки содержат 4–6 концентрических слоев тилакоидов вокруг цитоплазмы с видимыми зонами конвергенции на периферии клетки (рис.2а – в). В отрицательно окрашенных клетках наблюдались длинные (1–1,5 мкм) волокна (возможно, пили или структуры экзополисахаридов), подобные тем, которые наблюдались ранее у других цианобактерий ^29,30 , отходящие от внешней мембраны (Fig. 2d-e).

a — c Поперечное сечение ячеек. d — f Отрицательно окрашенные клетки. Масштаб: a 2000 нм, b 1000 нм, c 500 нм, d 1000 нм, e 200 нм, f 500 нм.Клеточная стенка CW, Т-тилакоиды, CS-карбоксисома, R-рибосома, гранула цианофицина CG.

Показатели роста в различных условиях

Для проверки устойчивости PCC 11901 к разной солености рост оценивался в присутствии широкого диапазона концентраций NaCl, от 0 до 10% (вес / объем), где морская вода составляет ≈ 3,5% NaCl (рис. 1b, дополнительный рис. 3a – c). Скорости роста PCC 11901 существенно не различались (дополнительные данные 1) в диапазоне концентраций NaCl 0–1,8% (мас. / Об.) (ANOVA, p = 0.43, η ² = 0,169) с максимумом 0,28 ч ^-1 при 1,8% (мас. / Об.) NaCl. Более высокие концентрации NaCl отрицательно сказывались на скорости роста, хотя штамм был способен переносить до 10% (мас. / Об.) NaCl с временем удвоения 12 ч (скорость роста аналогична скорости роста галотолерантной микроводоросли Dunaliella ³¹ ). Хотя PCC 7002 также может расти в присутствии высокой соли (до 9% (мас. / Об.) NaCl ³² ), мы обнаружили, что в наших руках штамм PCC 11901 показал более высокую солеустойчивость (дополнительный рис.3d).

Различные комбинации температуры, интенсивности света и концентрации CO ₂ были протестированы, чтобы исследовать их влияние на рост (рис. 1c, d). Для сравнения, PCC 11901 выращивали вместе с двумя другими быстрорастущими и устойчивыми к высоким температурам штаммами — UTEX 2973 и PCC 7002 (дополнительный рисунок 4). Все штаммы, выращенные в условиях атмосферного CO ₂ и низкой интенсивности света (100 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 ), показали одинаковое время удвоения (дополнительная таблица 1).При более высоком освещении штамм UTEX 2973 рос быстрее в условиях атмосферного CO ₂ , хотя на этот результат могло повлиять присутствие бикарбоната натрия в среде BG-11 (используемой для выращивания пресноводных штаммов) и отсутствие такого источника углерода в среде. Среда AD7 (используется для выращивания морских штаммов). Оптимальные условия роста для PCC 11901 оказались 38 ° C при 1% (об. / Об.) CO ₂ (рис. 1c), при этом самое короткое время удвоения (2,14 ± 0,06 ч) наблюдалось при интенсивности света 660 мкмоль фотоны м ⁻² с ⁻¹ (рис.1г). Максимально допустимая температура роста для PCC 11901 составила 43 ° C. В наших условиях роста UTEX 2973 был самым быстрорастущим штаммом (самое короткое время удвоения 1,93 ± 0,04 ч при 41 ° C, 500 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 и 1% (об. / Об.) CO ₂ ), хотя это преимущество перед штаммами PCC 11901 и 7002 становится менее очевидным при выращивании в течение более длительных периодов времени. Через 24 часа культивирования UTEX 2973 достиг более низких значений OD ₇₃₀ , чем два других штамма, и не смог превысить OD ₇₃₀ ≈ 10 через 4 дня (дополнительный рис.5), эффект, который также наблюдался ранее ³³ . Во всех испытанных условиях освещения PCC 11901 накопил больше биомассы через 4 дня роста (4,9 г DW L ^-1 ), чем PCC 7002 и UTEX 2973 (3,7 и 2,5 г DW L ^-1 соответственно; дополнительный рис. 5a). Однако все штаммы накапливали немного меньше биомассы при высокой освещенности, эффект особенно заметен в случае PCC 7002, который снизился с 3,1 до 2,6 г DW L ^-1 в более поздние моменты времени (дополнительный рис.5б).

Филогенетическое отнесение и анализ последовательности генома

Геном штамма PCC 11901 был секвенирован с использованием методов секвенирования нового поколения Illumina и PacBio, собран и депонирован в GenBank под номером доступа CP040360.1. Две последовательности (одна хромосома и одна плазмида) были полностью покрыты и циркуляризированы, а четыре более короткие последовательности (наиболее вероятно, плазмиды) размером от 10 до 98 т.п.н. не могли быть закрыты. Полный размер генома составляет 3081514 п.н., что аналогично размеру других филогенетически родственных штаммов цианобактерий, со средним содержанием GC 49.5%. Хромосома содержит 42 тРНК, 6 рРНК, 4 нкРНК и 2943 генных последовательности (3316 включая плазмиды). Распределение всех генетических элементов в геноме показано на 2 внешних концентрических кругах, соответствующих направлениям каждой из двух цепей на рис. 3.

Дорожки: CDS (серый), тРНК (розовый), рРНК (зеленый), нкРНК (оранжевый), тмРНК (темно-синий), регуляторные элементы (бирюза), GC Skew (выше среднего: зеленый, ниже среднего: фиолетовый) и Содержание GC (черный).Показатели BLAST: PCC 7117 (зеленый), PCC 7002 (голубой), PCC 8807 (коричневый) и PCC 73109 (розовый) по сравнению с геномом PCC 11901. Изображение создано с помощью онлайн-инструмента CGView Server ^{BETA 34} .

Анализ средней нуклеотидной идентичности (ANI) хромосомы выявил 97,48% идентичность с Synechococcus sp. PCC 7117, 96,99% как для PCC 73109, так и для 8807, 96,76% для обычно используемого штамма PCC 7002 и 90,03% для PCC 7003. Полные последовательности генома вышеупомянутых штаммов сравнивали с геномом штамма PCC 11901 с использованием анализа BLAST в CGView. Сервер ^{34 инструмент} .Довольно необычно, что в геноме PCC 11901 имеется несколько основных вставок, изображенных белыми пробелами в оценках поиска BLAST, показанных на рис. 3, самые большие из ~ 24 т.п.н., которые не встречаются в других геномах цианобактерий. Анализ этих фрагментов показал сходство с генами других цианобактерий за пределами группы таксономии Synechococcales , с сильным преобладанием генов, кодирующих предсказанные гены гликозилтрансфераз (14 генов), компоненты переносчиков ABC, транспозазы, компоненты токсин-антитоксиновой системы и алкогольдегидрогеназу. (Дополнительная таблица 2).

В одной из эндогенных плазмид (номер доступа в GenBank: CP040361.1) мы идентифицировали ген, кодирующий гомолог 5-метилтетрагидроптероилтригутамат-гомоцистеин-S-метилтрансферазы (MetE, GenPept: QCS51047.1), участвующий в синтезе кобаламин-независимого метиона. Хотя большинство цианобактерий способны синтезировать кобаламин или псевдокобаламин, необходимый для кобаламин-зависимой метионинсинтазы (MetH), некоторые штаммы, такие как PCC 7002, не имеют MetE и, следовательно, являются строгими ауксотрофами кобаламина ^27,35 .Удивительно, но несмотря на то, что PCC 11901 содержит оба варианта метионинсинтазы, рост зависит от добавленного кобаламина (рис. 1a), что указывает на возможные мутации либо в самом гене metE , либо в соответствующем рибопереключателе кобаламина, ведущие либо к потере активности, либо к низкая экспрессия этого гена. Интересно, что гены, кодирующие три фермента пути спасения кобаламина ³⁶ — CobA (уропорфириноген-III C-метилтрансфераза, GenPept: QCS48576.1), CobQ (синтаза кобириновой кислоты, GenPept: QCS50783.1) и CobS (аденозилкобинамид-GDP-рибазолетрансфераза, GenPept: QCS48590.1) — могут быть обнаружены в хромосоме, что позволяет предположить, что они могли быть получены либо от других штаммов путем горизонтального переноса генов, либо из-за доступности кобаламина в локальных тканях. В окружающей среде путь биосинтеза мог быть потерян в процессе эволюции.

Трансформируемость и доступность молекулярных инструментов

Чтобы новый штамм мог быть использован для синтетической биологии и метаболической инженерии, он должен быть трансформируемым и иметь молекулярные инструменты для контролируемой экспрессии белка.Учитывая, что PCC 11901 является близким родственником PCC 7002, мы протестировали несколько молекулярных инструментов, уже установленных для PCC 7002. В одной конструкции (рис. 4a) ген yfp был помещен под контроль конститутивного промотора P _cpt (a усеченный промотор cpcB из штамма PCC 6803, функциональный в PCC 7002 ³⁷ ) и вставленный между фланкирующими областями гена acsA (ацетил-КоА-синтетаза), метод, использовавшийся ранее для выделения безмаркерных мутантов PCC 7002 с использованием акриловой кислоты. кислота для контрселекции ³⁸ .Во второй конструкции ген yfp и кассета устойчивости к спектиномицину были клонированы между фланкирующими областями гена psbA2 (кодирующего субъединицу D1 фотосистемы II), и экспрессия YFP контролировалась синтетическим IPTG-индуцибельным P _clac143. промоутер ³⁷ . Затем PCC 11901 трансформировали естественной трансформацией, и положительные трансформанты подтверждали с помощью ПЦР колоний (дополнительный рис. 6a, b). Флуоресцентная микроскопия подтвердила успешную экспрессию YFP в обеих конструкциях (рис.4b) с экспрессией в штамме Δ psbA2 :: P _clac143 -YFP, обнаруживаемом только после индукции IPTG. Хотя целевые геномные локусы для этих двух конструкций различаются, промотор P _cpt оказался более сильным, чем индуцированный промотор P _clac143 , поскольку соотношение единиц относительной флуоресценции (RFU) на OD ₇₃₀ было выше, с YFP уровни увеличиваются в 45 раз при индукции IPTG по сравнению с неиндуцированными контрольными клетками (фиг. 4c). Эффективность трансформации (оцениваемая по разрушению локуса fadD с использованием линейной ДНК, содержащей кассетный ген устойчивости к антибиотикам) достигла 1.03 × 10 ⁴ КОЕ мкг ^-1 , при этом все трансформанты полностью сегрегированы после первого раунда повторного разделения (дополнительный рис. 6g).

a Схематическое изображение конструкций, используемых для естественной трансформации и гомологичной рекомбинации в хромосоме штамма 11901. В векторе pSW036 ген yfp был вставлен между 700 п.н. фланкирующими областями гена acsA , и экспрессия контролировалась синтетическим и конститутивным промотором P _cpt .В векторе pSW039 ген yfp (под контролем синтетического индуцибельного промотора P _clac143 ) вместе с регулятором lacI и кассетой устойчивости к спектиномицину были вставлены между 700 п.н. фланкирующими областями гена psbA2 . . b Изображения флуоресцентной микроскопии клеток, трансформированных конструкциями YFP. В качестве контроля хлорофилл аутофлуоресценция WT, Δ acsA :: P _cpt -YFP и Δ psbA2 :: P _clac143 -YFP показана на левой стороне панели, а флуоресценция YFP показан на средней панели.Δ psbA2 :: P _{clac143 Штамм} -YFP инкубировали в течение 24 ч с / без добавления 1 мМ IPTG перед визуализацией. Масштаб 10 мкм. c Сравнение силы и индуцибельности промоторов P _cpt и P _clac143 . Относительную флуоресценцию YFP по отношению к OD ₇₃₀ измеряли для культур при OD ≈ 1 ( T = 0) через 6 и 24 часа. Столбики представляют собой среднее значение n = 3 биологических повтора ± стандартное отклонение.

Разработка улучшенной питательной среды

Изменение состава питательной среды — распространенный подход к увеличению производства биомассы и вторичных метаболитов с использованием гетеротрофных микроорганизмов. ³⁹ .Напротив, большинство сред, обычно используемых для культивирования цианобактерий, были созданы более 40 лет назад и не оптимизированы для производства высокой биомассы. Действительно, модификация базовой среды A ⁺ , проведенная Clark et al. ³³ было показано, что увеличивает производство биомассы PCC 7002 примерно в 2 раза (до 10 гДВт L ^-1 ), а в другом отчете сера была определена как основное ограничивающее питательное вещество для роста PCC 6803 с высокой плотностью при использовании BG- 11 средний ⁴⁰ .

Вдохновленный этими отчетами, мы приняли систематический подход к улучшению роста PCC 11901 путем независимой оптимизации уровней нитратов, фосфатов и железа в среде AD7 (рис.5). Согласно Clark et al. ³³ , 20 мМ концентрации MgSO ₄ в обычной среде A ⁺ (и AD7) теоретически достаточно для 10-кратного увеличения биомассы штамма PCC 7002, и, таким образом, концентрации Mg и S не изменились. . Наши эксперименты привели к разработке модифицированной среды AD7 (далее называемой средой MAD), содержащей 96 мМ NaNO ₃ , 240 мкМ FeCl ₃ и 1,2 мМ фосфата. Напротив, среда A, описанная Clark et al.(«Модифицированная среда А» или среда «ММА» ³³ ) содержит 122 мМ NaNO ₃ , 1,1 мМ цитрата железа аммония и всего 31 мМ фосфата (добавлением 5,2 мМ в схеме с подпиткой). Мы обнаружили, что фосфат на уровнях> 0,8–1,2 мМ отрицательно влияет на рост PCC 11901 (рис. 5d, дополнительный рис. 7), хотя другой отчет показывает усиление роста PCC 7002 при добавлении в среду 5 мМ KH ₂ PO ₄ , 15 мМ Mg ²⁺ и 5 мМ SO ₄ ^{2− 41} .Наибольшее накопление биомассы было достигнуто через 8 дней культивирования в среде MAD (12,3 гДМ L ^-1 ), в то время как в случае среды MMA, содержащей 5,2 мМ фосфата, максимум 10,2 гДВт / л был получен за 8 дней и 10,3 гДМ. L ^-1 через 10 дней при добавлении 31 мМ фосфата (дополнительный рис. 7). Эта разница в биомассе может отражать осаждение железа, магния, кальция и других питательных микроэлементов в виде фосфатных солей в среде ММА, что снижает их биодоступность при щелочном pH.

Анализ влияния добавления в среду увеличивающихся концентраций нитрата натрия, хлорида железа (III) и дигидрофосфата калия на рост PCC 11901. Условия роста: 38 ° C, 200 об / мин, 300 мкмоль фотонов м ^{— 2} с ⁻¹ интенсивности света (соотношение светодиода RGB 4: 2: 1) и 1% CO ₂ . среда AD7 с двойной концентрацией FeCl ₃ (30 мкМ) была дополнена широким спектром концентраций NaNO ₃ . b В среду AD7, обогащенную 96 мМ NaNO ₃ , добавляли различные концентрации FeCl ₃ . c , d Модифицированная среда AD7 с 96 мМ NaNO ₃ и 240 мкМ FeCl ₃ была дополнена увеличивающимися концентрациями KH ₂ PO ₄ и протестирована на рост и накопление биомассы в течение 10 дней. Точки данных с планками ошибок представляют собой среднее значение n = 3 биологических повтора ± стандартное отклонение.

Высокое производство биомассы в оптимизированной среде

Для оценки общего использования модифицированных сред для выращивания цианобактерий (MAD для морских штаммов и 5-кратная концентрированная среда BG-11 (5xBG) для пресноводных штаммов), других широко используемых штаммов — морских PCC 7002 и три пресноводных штамма PCC 7942, UTEX 2973 и PCC 6803 — выращивались вместе с PCC 11901 при 30 ° C (оптимальные температуры для PCC 7942 ⁴² и PCC 6803 ⁴³ ) и с 1% (об. / об.) CO ₂ / воздух, используя систему встряхивания колбы.PCC 11901 явно превзошел все другие модельные цианобактерии, вырастая до OD ₇₃₀ = 101 и накапливая максимум 18,3 г DW L ^-1 биомассы, что почти вдвое превышает биомассу PCC 7002 (9,3 г DW L ^-1 ) ниже. такие же условия (рис. 6а – б). Среди пресноводных цианобактерий PCC 6803 накопил самую высокую биомассу (6,9 г DW L ^-1 ), за ним следуют PCC 7942 и UTEX 2973 — оба около 6,5 г DW L ^-1 . Что касается пригодности к культуре, потеря светособирающего комплекса фикобилисом, которая является симптомом общего стресса ⁴⁴ , уже была очевидна в случае UTEX 2973 после 3-4 дней культивирования, но менее очевидна для штаммов PCC 7942 и 11901. даже через 10 дней культивирования (рис.6в, г). Наблюдаемые различия в размере гранул морских штаммов по сравнению с пресноводными штаммами можно объяснить более высоким удерживанием воды и / или более высоким содержанием экзополисахаридов (рис. 6e).

Все штаммы выращивали в трех экземплярах при 30 ° C, встряхивании 200 об / мин при непрерывном освещении с использованием RGB-светодиода с соотношением 1: 1: 1. Synechococcus sp. PCC 11901 и 7002 были выращены в среде MAD при первоначальном количестве фотонов 150 мкмоль m ^-2 с ^-1 , которое затем было увеличено до 750 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 через 1 день. Synechococcus elongatus UTEX 2973 выращивали в среде 5xBG в тех же условиях. Synechococcus elongatus sp. PCC 7942 и Synechocystis sp. PCC 6803 также выращивали в среде 5xBG, при этом интенсивность света постепенно увеличивалась с 75 до 150 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 (день 1) и в конечном итоге устанавливалась до 750 мкмоль фотонов м ^-2 с ^-1 (день 2). a , b Сравнение кривой роста и накопления биомассы всех протестированных штаммов цианобактерий. c Образцы культур за 10 дней культивирования. Образцы разбавляли, чтобы продемонстрировать пигментацию, и они не являются репрезентативными для фактической плотности клеток в культуре. d Спектры целых клеток культур, собранных после 10 дней культивирования и разведенных до той же OD ₇₃₀ . Выделенные пики представляют основные полосы поглощения для: хлорофилла a (chl a ) — λ = 440 и 680 нм, каротиноидов (c) — λ = 490 нм и фикобилисом (PBS) — λ = 620 нм. e Сравнение размера осадка клеток из 1 мл каждой культуры, собранной после 10 дней культивирования. Точки данных с планками ошибок представляют собой среднее значение n = 3 биологических повтора ± стандартное отклонение.

Несмотря на многочисленные усилия, нам не удалось вырастить ни одну из пресноводных цианобактерий, использованных в этом исследовании, до уровней биомассы, превышающих 7 гДВт л ^-1 . Оптимизация среды была более сложной, возможно, из-за более низкой устойчивости этих штаммов к более высокой ионной силе среды.Мы протестировали пять различных составов сред для UTEX 2973, PCC 7942 и PCC 6803 (дополнительный рисунок 8, дополнительная таблица 3). Добавление в среду BG-11 еще большего количества нитрата, фосфата, цитрата железа (III) аммония и сульфата магния имело ограниченный успех, поскольку, несмотря на быстрый начальный рост, количество культур резко снизилось через несколько дней (дополнительный рис. 7a – c) . Культуры, выращенные в модифицированной среде MAD без хлорида натрия, также не показали хороших результатов (дополнительный рис. 7d).В наших руках 5xBG, содержащий в 5 раз более высокие концентрации всех питательных веществ (включая следы металлов), чем обычный BG-11, был наиболее успешной рецептурой (см. Рис. 5 и дополнительный рис. 8e, f), и, к нашему удивлению, это дополнило. среда с концентрацией фосфатов и нитратов до уровней в среде MAD (модифицированный 5xBG, 5xBGM) привела к полному обесцвечиванию штамма PCC 6803 через 10 дней (дополнительный рис. 9a, b). Поскольку среда 5xBGM содержит больше нитратов и фосфатов, чем 5xBG, маловероятно, что культуры обесцвечиваются в результате недостатка питательных веществ.

Чтобы проверить, улучшит ли добавка CO ₂ накопление биомассы морских штаммов, PCC 11901 и PCC 7002 культивировали при 5% (об. / Об.) CO ₂ с использованием среды MAD (рис. 7). Хотя влияние более высокого содержания CO ₂ на рост PCC 11901 было минимальным, PCC 7002 накапливал примерно на 50% больше биомассы, достигая 15,8 гДВт л ^-1 . К нашему удивлению, дальнейшее обогащение среды MAD более высокими концентрациями N, P, Fe, микроэлементов и кобаламина (так называемая «среда MAD2») значительно улучшило накопление биомассы PCC 11901, давая 32.6 гДМ L ^-1 , в то время как небольшое улучшение также наблюдалось для PCC 7002, который накопил 19,2 гДМ L ^-1 . Эти значения намного выше, чем в предыдущих отчетах для цианобактерий, выращиваемых в периодическом культивировании. Такое большое увеличение биомассы, по-видимому, объясняется увеличением размера клеток, поскольку количество клеток существенно не отличалось от количества клеток PCC 7002 (дополнительные рисунки 10–12). Однако с 5-го дня культивирования в MAD2, 5% (об. / Об.) CO ₂ и 750 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 , клетки PCC 11901 стали значительно больше, чем клетки PCC 7002 (дополнительные Инжир.10d), достигая медианной длины клеток на 10 день 3,01 ± 0,60 мкм против 2,20 ± 0,41 мкм для PCC 7002 ( n = 102, p = 5,82 × 10 ⁻²³ , см. Дополнительный рисунок 12c) .

Штаммы выращивали в трех экземплярах при 30 ° C, встряхивании 250 об / мин при непрерывном освещении с использованием RGB-светодиода с соотношением 1: 1: 1. Synechococcus sp. PCC 11901 и PCC 7002 были выращены в среде MAD и MAD2 при первоначально 150 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 , затем увеличили до 750 мкмоль фотонов m ^-2 с ^-1 через 1 день. .Точки данных с планками ошибок представляют собой среднее значение n = 3 биологических повтора ± стандартное отклонение. a , b Кривая роста и сравнение накопления биомассы штаммов PCC 11901 и PCC 7002 в среде MAD и MAD2. c Продолжение кривой роста и накопление биомассы штамма PCC 11901, культивированного в среде MAD2 в течение 14 дней.

Фотоавтотрофное производство свободных жирных кислот

После демонстрации того, что штамм PCC 11901 поддается генетическим манипуляциям, была разработана доказательная демонстрация биотехнологического потенциала штамма путем модификации PCC 11901 для фотоавтотрофного производства FFA, которые являются соответствующее промышленное сырье ^18,45 .Мы вставили усеченную версию гена тиоэстеразы E. coli (‘ tesA ) ¹³ , оптимизированного по кодонам для PCC 7002, под контролем индуцибельного промотора P _clac143 ³⁷ , в геномы обоих PCC 11901 и PCC 7002, одновременно выбивая длинноцепочечную CoA-лигазу жирных кислот ( fadD ), с образованием «11901 Δ fadD :: tesA » и «7002 Δ fadD : : tesA ”(рис. 8а). Нокаутные штаммы только гена fadD (Δ fadD ) и WT использовали в качестве производственных контролей.Чтобы проверить, улучшит ли среда MAD дальнейшее повышение продуктивности, все штаммы выращивали бок о бок, используя среду AD7 или MAD.

a Схематическое изображение пути продукции FFA. Усеченный ген ацил-КоА тиоэстеразы (‘ tesA ) под контролем индуцибельного промотора P _clac143 был вставлен в хромосому с одновременным нокаутом эндогенной длинноцепочечной жирнокислотной — КоА-лигазы ( fadD ).«TesA превращает жирный ацил-АСР в свободную жирную кислоту, а его обратное превращение в жирный ацил-КоА сводится к нулю, выбивая эндогенный fadD . Сравнение роста и продуктивности FFA сконструированного Synechococcus sp. Штаммы PCC 11901 и PCC 7002 использовали обычную среду AD7 ( b ) и MAD ( c ). Сплошные и пунктирные линии показывают рост (измерения OD ₇₃₀ ) индуцированных и неиндуцированных культур соответственно, а столбцы столбцов соответствуют продукции FFA.Стрелки указывают на добавление индуктора IPTG и увеличение интенсивности света. d Сравнение роста и продукции FFA штаммами WT (пунктирные линии и столбцы) и Δ fadD нокаут-контрольными штаммами (темные линии и столбцы). и Анализ продукции FFA сконструированным штаммом PCC 11901, индуцированным при OD ₇₃₀ ≈ 8. FFA экстрагировали либо непосредственно из культуры, либо из супернатанта среды. Для OD ₇₃₀ точки данных измерений с планками ошибок представляют собой среднее значение n = 3 биологических повторения ± стандартное отклонение (для PCC 11901 Δ fadD :: tesA штамм n = 2 в панелях b и c и n = 3 на панели e ).Концентрация FFA как среднее значение n = 6 повторов (три биологических и два технических) ± стандартное отклонение (для 11901 Δ fadD :: tesA штамм n = 4 в панелях b и c и n = 6 в панели e ). f Деталь культур штаммов WT и сконструированных штаммов PCC 11901, центрифугированных после 7 дней культивирования. г Липидомные профили FFA из штаммов-продуцентов PCC 11901 и PCC 7002 FFA: C12: 0 (лауриновая кислота), C14: 0 (миристиновая кислота), C16: 0 (пальмитиновая кислота), C18: 0 (стеариновая кислота) и C18: 1n9t (элаидиновая кислота).

Штаммы PCC 11901 и PCC 7002 Δ fadD :: tesA , выращенные в среде AD7, выделяли аналогичные количества FFA (0,41 ± 0,07 и 0,34 ± 0,08 мМ соответственно) через 3 дня после индукции (рис. 8b), в то время как неиндуцированные штаммы выделяли <0,07 мМ FFA. Разница в продуктивности стала более очевидной при выращивании штаммов на среде MAD. Сконструированный штамм PCC 11901 Δ fadD :: tesA был способен расти быстрее, чем аналог PCC 7002, и через 4 дня после индукции IPTG уже был выведен 3.97 мМ FFA, что почти вдвое превышает количество штамма PCC 7002 Δ fadD :: tesA за тот же период времени (2,01 мМ) (фиг. 8c). Принимая во внимание рост клеток, общая продуктивность FFA была выше для штамма PCC 11901 (0,12 ммоль л ^-1 на OD на 5 день) по сравнению с PCC 7002 (0,05 ммоль L ^-1 на OD и 0,08 ммоль L ^{). -1} на OD на 5-й и 7-й день соответственно). Рост как штаммов PCC 11901, так и PCC 7002 подавлялся через 5-7 дней культивирования, возможно, из-за высоких концентраций FFA в культуральной среде, которые, как ранее было показано, оказывают негативное влияние на рост других цианобактерий ⁴⁶ .Контрольный штамм PCC 7002 Δ fadD , выращенный в среде MAD, продуцировал 0,1 мМ FFA, почти в два раза больше, чем контрольный штамм PCC 11901 Δ fadD , при этом уровни продуцирования в обоих WT были незначительными в пределах статистической ошибки (рис. 8d). ). Большие погрешности во всех измерениях FFA связаны с низкой растворимостью FFA в воде, что заставляет их плавать на границе раздела воздух-жидкость и прилипать к поверхностям культурального сосуда (рис. 8f).

Чтобы проверить, можно ли дополнительно улучшить продукцию FFA с помощью различных методов экстракции и индукции поздней фазы, штамм PCC 11901 Δ fadD :: tesA выращивали в среде MAD, а FFA экстрагировали гексаном непосредственно из клетки. культур или из супернатанта бесклеточной среды (рис.8д). В течение первых нескольких дней различия между концентрацией FFA в культуре клеток и экстрактах среды не были существенными. Однако через 7 дней образцы, извлеченные непосредственно из культуры клеток, содержали значительно больше FFA (6,16 мМ), чем образцы из супернатанта.

Состав произведенных FFA был оценен анализом газовой хроматографии (ГХ) как в PCC 11901, так и в PCC 7002 Δ fadD :: tesA сконструированных штаммах (дополнительный рисунок 13), при этом не было обнаружено значительных различий между двумя штаммами. , несмотря на их разную конечную производительность.Для штамма PCC 11901 Δ fadD :: tesA пальмитиновая кислота (C16: 0) составляет в среднем примерно 65% от общего количества продуцируемых FFA, за ней следуют миристиновая кислота (C14: 0) — 23% и стеариновая кислота ( C18: 0) — 9% (рис. 8ж).

15 лучших однодневных поездок из Сан-Паулу • I Heart Brazil

А, Сан-Паулу.

Часто недооцененный город в Бразилии, но с множеством интересных достопримечательностей и ресторанов.

Но если Сан-Паулу недооценивают, можете ли вы представить себе окружающие города и поселки в штате?

Есть множество однодневных поездок из Сан-Франциско. Пауло, о котором не знает большинство туристов.Ну не ты.

Я составил список лучших Однодневные поездки в Сан-Паулу, чтобы вы могли узнать немного больше о штате и регионе. Я также включил общее описание того, как добраться до этих мест.

Однодневные поездки из Сан-Паулу, Бразилия

Как человек, родившийся и выросший в Сан-Паулу, моя миссия — показать больше моего состояния мужу, который не Бразильский.

Так что ожидайте увидеть этот список городов, мы можем посетить за один день, так как мы планируем совершить много однодневных поездок из Сан-Франциско Пауло.

Прожив в Бразилии почти всю жизнь я до сих пор восхищаюсь архитектурой и историей нового места, которые я открываю.

Так что поверьте мне, когда я скажу, что вы многое увидите и испытаете во время поездки в Бразилию!

Pssst: Ищете жилье в Сан-Паулу? Тогда ознакомьтесь с моим путеводителем по лучшим районам города, где можно остановиться.

Не хватает времени, чтобы прочитать эту статью за один присест? Затем сохраните его на своей доске путешествий Pinterest.

Полезные советы для ваши однодневные поездки из Сан-Паулу

• Возьмите напрокат автомобиль: чтобы добраться до большинства перечисленных ниже городов, лучше арендовать автомобиль. Во многих случаях общественный транспорт недоступен или неудобен.
• Вождение в Бразилии: это может показаться устрашающим, но я скоро напишу полный пост с множеством советов, чтобы вы могли его решить.
• Используйте GPS: если вы пропустите выезд, возврат может быть нечетко обозначен. Кроме того, большинство уличных указателей на португальском языке, поэтому вам может потребоваться небольшая помощь, чтобы сориентироваться в стране.
• Купите туристическую страховку: она необходима для любой поездки — на машине или автобусе. Путешествуйте без проблем и ни о чем не беспокоясь. Я использую Safety Wing и с радостью рекомендую их своим друзьям. Кроме того, в одном из своих планов они предлагают отказ от повреждений при столкновении.
• На большинстве дорог есть платные дороги: всегда имейте при себе деньги, чтобы заплатить за проезд.

День Сан-Паулу поездки, Бразилия

Я мог бы составить список с 50-дневными поездками из Сан-Паулу. Легкий. Но для того, чтобы этот список был удобочитаемым, я буду говорить о нескольких городах около Сан-Паулу, которые вы можете посетить за день.

В идеале вы могли бы провести выходные в несколько таких мест, которые находятся подальше. Но решать только вам.

Без лишних слов, перейдем к лучшие однодневные поездки из Сан-Паулу.

В маленьком городке Педра Бела вы можете скользите по самой длинной молнии в Бразилии.

Поднимитесь на одноименный холм, чтобы задыхаться.Не из-за ступенек, а из-за потрясающего пейзаж перед вами.

Затем на несколько секунд вы почувствуете свежий воздух на вашем лице, пока все кажется неприкасаемым и идеально.

Вы скользите по зеленым полям вдоль Стальной трос длиной 6234 фута (1,900 м) на скорости 66 миль / ч (107 км / ч). (Доступно только на выходные.)

Эта деревня находится всего в 2 часах езды на автомобиле. от города, что делает его идеальной однодневной поездкой из Сан-Паулу.

Кроме того, город предлагает больше приключений, в том числе туры на джипах и квадрициклах, водопады, лазание по деревьям и буддийский храм Тайкандзи, всего в 20 минутах езды от центра города.

Как добраться до Pedra Bela

Двигайтесь по дороге Presidente Dutra Road и, через несколько минут сверните на съезд в направлении Fernão Dias Road (BR-381).

Через час езды сверните на съезд 22. в сторону Bragança Paulista / Socorro (BR-146) и съехать направо на дорогу SPA 109/008 Педра Бела.

Читать дальше: Чем заняться в Бразилии

Посещение крупнейшего Буддийский храм приятно отличается от шумного Сан-Паулу.

Потратьте некоторое время на изучение буддизма или принять участие в ритуале, прогуляться по этому прекрасному храму Сан-Паулу или его ухоженным сады.

Этот маленький кусочек Китая в Бразилии проводит большинство церемоний на китайском языке, а некоторые — на португальском, но они тем не менее, это мирное занятие, которое нравится большинству посетителей.

На этом сайте вы также найдете Музей буддийского искусства, сувенирный магазин (идеально подходит для покупки талисманов на удачу) и отличный вегетарианский ресторан, который открывается только по выходным.

Обратите внимание, что администрация храма не позволяет использовать штативы или дроны даже в садах. Кроме того, фотографирование внутри закрытые места не допускаются, только снаружи в садах.

Помимо китайского Нового года и Весака, они также отмечают июньскую вечеринку, на которой много бразильских вегетарианцев. еда, типичные игры с этих праздников и много веселья.

По воскресеньям утром есть бесплатный Тай Практика Чи без каких-либо оговорок и другие действия.

Как добраться до храма Цзу Лай

Добраться сюда можно тремя способами:

• Uber : (Щелкните здесь, чтобы получить скидку 5 долларов на первую поездку)
  • Это стоит около 60 реалов в одну сторону с UberX.
• На автомобиле :
  • Возьмите Rodovia Raposo Tavares (SP-270), затем сверните на съезд в направлении Estrada Fernando Nobre примерно на 28 км. Он приведет вас к храму.
• Частный автобус :
  • Автобус отправляется точно в 8:40 по воскресеньям от Rua Dr.Родриго Силва, рядом с магазином Ikesaki, недалеко от станции метро Japan-Liberdade, возвращается около 16:00. Бронирование не требуется, а обратный билет стоит около 15 бразильских реалов.

, который идеально подходит для тех, кто путешествует с друзьями, партнерами или семьей, винный маршрут включает более 30 винных заводов, винокурен, ресторанов и хостелов, расположенных через дорогу под названием Эстрада-ду-Винью (английский: вино Дорога).

Это дорога, где каждый останавливается этих заведений, или только в тех, которые вы, конечно, хотите хорошо поесть и насладитесь дегустацией вин.

Начните самостоятельную экскурсию в Белле Винодельня Аврора прямо перед началом маршрута. Там выпейте чашку кофе пока вы любуетесь фантастическим видом на Сан-Роке.

Затем отправляйтесь на Столисковский ликеро-водочный завод по адресу: найти эксклюзивные местные продукты, такие как водка из белого шоколада.

Да, еще они подают Sakerita Stoliskoff, их собственный вариант бразильского коктейля под названием кайпиринья.

Напиток из лайма, сахара и местный ром подают на камнях, но в Сакерите его подают с саке. рома.

Затем продолжайте путь к Кангуере, интимному магазин, где можно купить вино, ликеры, салями, сыр и изделия ручной работы.

Следующая остановка — винодельня Góes, самый большой на этом маршруте и один из крупнейших в Бразилии.

Здесь, помимо дегустации вина, вы также найдете винный магазин и итальянский ресторан, идеально подходящие для заслуженная еда.

Я бы закончил остановкой в ​​Палмейрасе Винодельня, место намного меньше по сравнению с Гуэсом, но очень уютное и интимное.

Есть две интересные статуи вне Бога и Богини Вина. Ой, и обязательно остановитесь на их шоколадный магазин. За это нужно умереть.

Вы также можете совместить Зу Лай и Винную дорогу в увлекательной однодневной поездке с местным водителем. Щелкните здесь, чтобы проверить это на Viator.

Как следует из названия, в этом городе есть уникальный художественная ярмарка с множеством ремесел, искусства, бижутерии ручной работы и деревенской мебели.

Embu das Artes — очаровательный, красочный город с маленькими ресторанчиками и дружелюбными торговцами поделками в городе центр.

Эта ярмарка проводится с 1969 года. Это прекрасное место, где можно поесть местной кухни и сделать покупки, включая сувениры, картины, предметы народного искусства, керамику, украшения для дома, резьбу по дереву, религиозные товары и многое другое. Выбор выдающийся и по разумной цене.

Постарайтесь прийти рано утром в в этот уик-энд ярмарка, чтобы не было многолюдно, и вы могли лучше насладиться этим местом.Или даже быстро найти место для парковки.

Как добраться до Embu das Artes

Возьмите проспект профессора Франсиско Морато и сверните на Rodoanel Mario Covas в сторону BR-116 Regis Bittencourt. Выйти на BR-116 и продолжайте движение по этой дороге до съезда сразу после км 28.1

Оттуда пара минут из города. Обязательно используйте GPS или Google Maps. Это займет около 40 минут. автомобиль.

Кроме того, вы можете отправиться в недорогую частную экскурсию с местным гидом и водителем.Водитель встретит вас в Сан-Паулу и проведет с гидом на полдня по городу. Хорошее соотношение цены и качества! Щелкните здесь, чтобы проверить это на Viator.

Uber там будет стоить около 63 бразильских реалов в одну сторону, или вы можете сесть на метро + автобус.

Для этого дойдите до станции метро São Paulo-Morumbi (желтая ветка) и сядьте на автобус 033 в направлении Embu das Artes на автовокзале. Автобус останавливается рядом с центром города, но будьте внимательны, указателей на английском нет.Дорога туда займет чуть больше часа.

Пусть ваш авантюрист восстанет в Бойтуве.

Этот город является столицей прыжков с парашютом, так как это известное место для тандемных прыжков с парашютом. Многие мои друзья прыгали с парашютом в Бойтуве, и им всем это нравилось.

Полезно знать: местные лето и осень — это лучшие сезоны для прыжков.

Но это еще не все, что можно найти в этом городе.Для любителей мягких приключений полет на воздушном шаре — это, скажем так, более спокойный способ насладиться видами.

Помимо воздушного спорта, этот турист В городе также есть несколько природных и исторических достопримечательностей, в том числе Музей Погонщиков и экологический парк с множеством диких птиц.

Как добраться до Бойтувы

Двигайтесь по маргинальному проспекту Тиете до SP-21 / Rodoanel и продолжайте движение по BR-374 Presidente Castello Branco Ave до Бойтува. Поездка на машине займет около 1 часа 30 минут.

Жемчужина Атлантики, так называют Гуаружу, город с одними из самых красивых пляжей в Сан-Паулу.

Всего береговая линия составляет около 13,7 миль (22 км) в длину и может похвастаться 27 пляжами.

Некоторые из этих пляжей вполне урбанизированы как Энсеада и Питангейрас, в то время как другие дикие, только доступные по пешеходным тропам или на лодке.

По всей береговой линии вы найдете несколько смотровых площадок, в том числе холмы Кайша-д’Агуа и Малуф. Оба предлагают потрясающие виды на регион.

Помимо исторических мест, таких как крепость Санто-Амаро-да-Барра-Гранди, в городе много еды места проведения тоже.

Некоторые из них являются простыми барами на берегу моря и киоски, а также рестораны на проспекте Мигеля Стефано. (Отличные морепродукты.)

Как добраться до Гуаружа

Возьмите Ricardo Jafet / Rodovia dos Imigrantes (SP-160) и выезжайте в направлении Кубатао / Гуаружа / Бертиога.

Продолжайте движение по Rodovia Cônego Domênico Rangoni (BR-101) и прямо на Rodovia Piaçaguera-Guarujá (SP-248) до читать город.

Кроме того, вы можете отправиться в групповые туры, которые сочетают в себе посещение нескольких пляжей и достопримечательностей в Сантосе, Сан-Висенте и Гуаружа. Гид встретит вас в вашем отеле в Сан-Паулу и покажет вам несколько интересных мест в городах, о которых я упоминал, а у вас еще есть время, чтобы насладиться пляжем. Нажмите здесь, чтобы увидеть это на Viator.

Если вы путешествуете с ограниченным бюджетом, знайте что есть автобусы от автовокзала Jabaquara (на синей ветке метро) уезжая, отправляйтесь в Гуаружу. Поездка в одну сторону стоит около 37 бразильских реалов и занимает около 1:30.

Рядом с Гуаружей вы также можете насладиться днем ​​в Сантосе. В городе находится самая обширная и загруженная гавань в Бразилии, и именно здесь Пеле и Неймар, бразильские футболисты, начали свою карьеру.

Вы можете посетить Сантос на выходных из Сан-Паулу, но однодневная поездка тоже будет приятной.

Отправьтесь на прогулку на шхуне по заливу Сантос или загорать на пляже. Гонзага, Эмбаре, Апаресида, Жозе Менино и Бокейран самые популярные пляжи в Сантосе.

Совершите 40-минутную поездку в старом трамвае через исторический центр или прогуляйтесь по музеям, если хотите.

Обязательно посетите музей Пеле, четырехэтажное современное здание, рассказывающее историю бразильской легенды футбола.

Также не пропустите Музей кофе. расположен в здании бывшей кофейни.

Это сооружение восходит к 1920-е годы, преимущественно барочная и неоклассическая архитектура, вместе с его мраморные полы впечатляют каждого посетителя.

Большинство панелей на португальском и на английском языке, но экскурсии только на португальском языке.

Ой, и не ходи домой, пока не потягиваешь Бразильский кофе или покупка, чтобы забрать домой. Бразильский кофе без сомневаюсь, уникальный сувенир.

Как добраться до Сантоса

Take Ricardo Jafet / Rodovia dos Imigrantes (SP-160) и выезд в сторону Сан-Висенте (Проспект Марешал Кандидо Мариану да Силва).

Продолжайте движение по проспекту Quintino Bocaiuva, Авеню Айртона Сенны и Авеню Президенте Вильсона

Он приведет вас к побережью в Сантосе. Залив.

Как вариант, вы можете отправиться в групповой тур, о котором я упоминал выше. Вместе с гидом вы посетите несколько пляжей и достопримечательностей в Сантосе, Сан-Висенте и Гуаружа.

Гид встретит вас в вашем отеле в Сан-Паулу и покажет несколько интересных мест в этих городах, а у вас еще есть время, чтобы насладиться пляжем. Нажмите здесь, чтобы увидеть это на Viator.

На общественном транспорте сядьте на автобусы, отправляющиеся от автовокзала Жабакуара (синяя линия метро) до Сантоса. Поездка в одну сторону стоит около 29 бразильских реалов и занимает около 1 часа 40 минут.

После Второй мировой войны многие голландцы (и Европейцы) иммигрировали на американский континент.

В Бразилии голландское поселение было город Холамбра, который получил такое название, потому что это соединение двух слов. Ну, вообще-то, два полуслова.

Holanda (английский: Нидерланды) и Бразилия вместе — Холамбра. Милый.

Так или иначе, национальная столица цветы — это романтическая однодневная поездка из Сан-Паулу, потому что в городе есть милый город центр, а также несколько элементов, на которые явно повлияли голландские культура.

Например, здесь есть открытая для посещения ветряная мельница, Исторический музей иммиграции и цветочные поля.Все это вы можете посетить во время экскурсии по городу.

А погода обычно приятная, тоже. Лучшее из двух стран вместе в нескольких минутах езды от Сан-Паулу.

Как добраться до Holambra

Возьмите Родовию душ Бандейрантес, продолжайте движение по Rodovia SP-340 в направлении Mogi Mirim. Это 2 часа езды.

Читать дальше: Лучшие туры и путевки в Бразилию

Этот город вдохновлен швейцарцами. который является идеальным местом для наслаждения горным климатом в штате Сан-Паулу.

Но знайте, что этот город нравится всем год, независимо от сезона.

Campos do Jordão имеет европейские черты, пышная природа и полный гастрономический план на любой вкус, особенно тем, кто стремится провести романтические моменты.

Некоторые из достопримечательностей этого района — Mirante Belvedere / Vista Chinesa, откуда вы можете смотреть на горы в этом регионе (местоположение).

Кроме того, отличным местом для посещения в городе являются Музей ксилографии (единственный в стране) и музей Фелиции Лейрнер под открытым небом (произведения польского художника из бронзы, гранита и цемента).

Сходите за чашкой кофе в Boa Vista Дворец (зимняя резиденция губернатора Сан-Паулу), дворец в польском стиле. замки 20 века.

И последнее, но не менее важное: прогуляйтесь по центр города Вила Капивари, где можно увидеть милые домики в европейском стиле, уютные кафе, и множество интересных магазинов.

Как добраться до Кампус-ду-Жордау

Двигайтесь по маргинальному Тиете в сторону Айртона Сенны (SP-070). Продолжайте движение, пока не дойдете до Кампус-де-Жордау через Rodovia Floriano Rodrigues Pinheiro (SP-383).Поездка займет 2 часа 30 минут.

Вы также можете отправиться на экскурсию с местным гидом, который не только встретит вас в большинстве отелей столицы, но и покажет вам город Кампус-ду-Жордау, в том числе места, о которых я упоминал выше. Нажмите здесь, чтобы увидеть это на Viator.

В Бразилии, когда что-то большое, из обычное, мы шутим, что оно пришло из Иту, города преувеличений.

Мы говорим, потому что комик из этого В городе шутили по поводу огромных размеров «кассав» из Иту. Его сексуальный юмор стал вирусным, и люди стали называть его городом, где все велико.

Интересный факт: фермеров отправляют в город необычно большие овощи, чтобы их можно было транслировать по телевидению.

Больше, чем просто город преувеличение, Иту — это также город, полный исторических достопримечательностей, красивых архитектура и здания культурного наследия.

Все это воспоминания богатого в прошлом, поскольку Иту когда-то считался одним из самых процветающих городов штата.

На площадях Матриз и Эксагерос есть большие статуи, напоминающие прозвище города.

На площади Матриз вы найдете Церковь Матрис XVIII века со статуей, подаренной португальскими королевскими властями. Семья.

Зайдите в Республиканский музей, чтобы увидеть несколько предметов, картин и фотографий первых этапов республиканского режима в Бразилии.

Затем отправляйтесь в Espaço Fábrica São Luis, бывшая паровая ткань превратилась в культурное пространство с отличными фотооперациями, здание старое.

Перед тем как покинуть город, совершите небольшую прогулку. в геологическом парке Варвито, одном из крупнейших в Южной Америке.

Как добраться до Иту

Возьмите Rodovia Presidente Castello Бранко (BR-374). Тогда возьмите Rodovia Dep. Архимед Ламмолья (BR-075) и выезд. в Иту-Карвалью. Это 1 час 40 минут езды.

Петар означает государственный туристический парк Альто-да-Рибейра, одно из лучших мест для посещения в Бразилии.

В парке много пещер, водопадов, пешеходных маршрутов, традиционных общин и киломбола, а также археологических и палеонтологических памятников.

Другими словами, Петар — настоящий рай. спрятан между долинами и горами.

Поскольку он имеет уникальные особенности, посетители приходите сюда в поисках приключений, таких как каскадирование, скалолазание и изучение пещеры.

Также в парке есть наиболее значимые часть охраняемого атлантического леса, а это значит, что вы найдете много дикой природы здесь.

Некоторые виды деятельности включают экологические образование, фотография и наблюдение за дикой природой.

Для любителей приключений и природы посещение в этот государственный парк обязательно.

Как добраться до Петара

Возьмите Rodovia Presidente Castello Бранко (BR-374), Родоанель Марио Ковас (SP-021). Выход на Р. Биттенкур. (BR-116) и сверните на съезд 475 в направлении Jacupiranga / Eldorado / Apiaí.

Там пройдите маленькую деревню, чтобы продолжайте движение по проспекту Адемара де Барроса (SP-193).В Эльдорадо садитесь на Родовию. Бенедито Паскуаль де Франса (SP-165), и он приведет вас в Петар. Это 5 часов езды.

Читать далее: 10 причин поехать в Бразилию

Бротас является частью Чапада-ду-Гуарани. известное место экотуризма и приключений в Сан-Паулу.

Город наполнен природными пейзажи и места для занятий адреналином.

Посетите парк Сальтос и наслаждайтесь небольшие водопады вдоль парка. Или еще лучше, проведите несколько часов в Кассорове Экопарк.

Этот зеленый парк полон водопады любой высоты, а также места для рафтинга, каякинга, треккинга, лазание по деревьям, зиплайнинг и даже каньонинг.

Интересный факт: Водопад Кассорова был четыре раза признан самым красивым водопадом в Бразилии.

Но это еще не все. Пары также могут насладиться романтическим путешествием в одно из уютных шале или хостелов в городе.

Путешествие в Бротас — одно из самых активные однодневные поездки в Сан-Паулу, но также одни из самых запоминающихся.

Как добраться до Brotas

Возьмите Родовию душ Бандейрантес и держитесь правее на развилке, чтобы продолжить движение по Rod. Адальберто Панзан. Используйте правую полосу по съезду на Рио-Кларо / Сан-Карлос — Родовия Вашингтон Луис (SP-310).

Продолжайте движение по SP-364 и сверните на съезд 206B. в сторону Итирапина / Бротас / Жау. Это 3 часа езды.

Кинкаку-дзи, который также является цинерарием, является точной копией одноименного храма XIV века в Киото. покрыт сусальным золотом.

Интересный факт: Кинкаку-дзи означает «Золотой павильон».

Хотя храм — это не место для туристических целей, а скорее религиозное место для церемоний, вы всегда можете зайти внутрь, чтобы возжечь благовония и посидеть в тишине.

Прогуляйтесь по саду и озеру, и наслаждайтесь прекрасным днем ​​на свежем воздухе. Хорошая перемена из хаотичного города центр.

Совет от местного жителя: Цветение сакуры около июля-августа.

Как добраться до Кинкаку-дзи

Возьмите проспект профессора Франсиско Морато и сверните на Rodoanel Mario Covas в сторону BR-116 Regis Bittencourt.Выйти на BR-116 и продолжайте движение по этой дороге до съезда 288 Itapecerica da Serra.

Оттуда вы будете ехать примерно 15 минут до храма. Это 1 час езды.

Лувейра и Виньедо являются частью Circuit of the Fruits вместе с другими восемью городами.

Этот регион получил такое название, потому что каждый из этих городов славится выращиванием разных сезонных фруктов.

Совместными усилиями жители, муниципалитеты и производители празднуют изобилие своих земель каждый год. И самым ярким событием этих праздников было не что иное, как фрукты.

Вы будете в восторге от количества и разнообразия тортов, джемов, пудингов, вин, кашасы, соков и многих других деликатесов.

У этих праздников также есть концерты, фольклорные вечеринки, конкурсы красоты и фотографии и многие другие развлечения в дружеской атмосфере.

Естественно, прогулка по этим городкам центров, вне зависимости от фестиваля, всегда приятно.

Праздничный календарь в каждом городе Схема Фруктов

• Январь
  • Jundiaí — Виноградная вечеринка и Wine Expo
  • Valinhos — Fig party и Guava Expo
• Февраль
  • Vinhedo — Винхедо — Винхедо — Виноградная вечеринка
5 9 апреля 9007 — Вечеринка с хурмой